PCR 마스터 믹스 계산기

자주 묻는 질문

• PCR 마스터믹스란 무엇이며, 왜 한 번에 만드나요?

  마스터믹스는 템플릿 DNA를 제외한 모든 반응 성분(버퍼, dNTP, MgCl₂, 폴리머라아제, 프라이머, 물)을 한 번에 담은 단일 조제액입니다. 각 튜브에 시약을 하나씩 피펫팅하는 대신 하나의 믹스를 나눠 담으면 시료 간 반응 조성이 동일하게 유지되고 피펫팅 오류와 시간이 줄어듭니다. 이 계산기는 1반응 레시피를 임의의 튜브 수로 스케일하여 각 성분의 반응당 및 총 µL 용량을 반환합니다.

• PCR 마스터믹스 계산기는 어떻게 사용하나요?

  반응 부피, 반응 수, 초과 계수, 튜브당 템플릿 부피를 입력하고 각 성분의 원액 농도와 최종 농도를 설정하세요: 버퍼(×/×), dNTP(mM/mM), MgCl₂(mM/mM), 폴리머라아제(U/µL 원액에 반응당 원하는 U 수), 그리고 두 프라이머(µM/µM). 결과에는 각 첨가물의 반응당 용량과 전체 마스터믹스 용량이 표시되고, 나머지는 뉴클레이즈 프리 워터로 채워집니다. 임의 성분(추가 MgCl₂나 프라이머 등)을 믹스에서 빼려면 그 최종 농도에 0을 입력하세요.

• 초과 계수란 무엇이고, 왜 마스터믹스를 더 만들어야 하나요?

  피펫팅할 때마다 각 시약이 조금씩 손실되므로 보통 랩에서는 마지막 튜브가 부족하지 않도록 5~10%의 믹스를 더 만듭니다. 이 계산기에서 초과는 레시피 전체에 곱하는 계수로, 1.1이면 10%를 더 준비하는 것이며 허용값은 1부터 10까지입니다. 모든 성분과 물 균형이 반응 수 × 초과분으로 스케일되므로, 결과의 총합이 묶음 튜브에 피펫팅할 용량입니다.

• 계산기는 각 성분의 용량을 어떻게 산출하나요?

  농도 기반 첨가물은 모두 희석 식 V = 최종 농도 × 반응 부피 ÷ 원액 농도를 사용하며, 이는 벤치에서 쓰는 것과 같은 C1V1 관계입니다. 폴리머라아제는 예외로, 원액은 U/µL로 입력하고 반응당 유닛 수를 지정하므로 용량은 유닛 수 ÷ 원액 농도가 됩니다. 물은 빼기로 맞춥니다. 반응 부피에서 템플릿과 모든 첨가물을 뺀 값입니다.

• 템플릿 DNA는 왜 마스터믹스에 포함하지 않나요?

  템플릿은 튜브마다 다른 유일한 성분이라, 마스터믹스를 나눠 담은 뒤 각 튜브에 따로 넣습니다. 그래도 튜브당 템플릿 부피를 입력하는 이유는, 계산기가 물 균형을 맞출 때 이를 빼서 믹스＋템플릿이 반응 부피와 정확히 같아지게 하기 위해서입니다. 첨가물이 템플릿 뒤에 남은 공간에 맞지 않으면 계산기가 오류를 알리고 반응 부피를 늘리거나 성분 농도를 낮추라고 안내합니다.