Calculadora de Concentración de Proteínas
Dos formas de estimar la concentración de proteína. (1) Beer–Lambert: introduzca el coeficiente de extinción molar y el peso molecular de su proteína para convertir A280 en mg/mL. (2) A280 × 1 = mg/mL usando la asunción estándar 1 A280 = 1 mg/mL, válida para muestras de proteínas mezcladas. La calculadora también informa una nota de pureza A260/A280.
Calculadora
Introduzca una lectura y calcule para ver la concentración
Concentración
c = A280 × dilution ÷ E(1 mg/mL) · c(M) = A280 × dilution ÷ ε
Cuantificación de Beer–Lambert: la absorbancia a 280 nm es proporcional a la concentración mediante el coeficiente de extinción de la proteína. En modo molar, el resultado también se convierte a mg/mL usando el peso molecular.
Acerca de este cálculo
Qué es
Proteins absorb at 280 nm because of aromatic residues (tryptophan, tyrosine, and to a lesser extent cystine). For a purified protein with a known molar extinction coefficient, Beer–Lambert gives an accurate concentration; for a mixed or unknown sample, the heuristic 1 A280 = 1 mg/mL is a usable estimate.
Por qué se usa
Almost every downstream application — gel loading, dilution to a working stock, assay setup — needs a protein concentration. A280 is the fastest available measurement, but the assumption you make (1 mg/mL per A280 vs. Beer–Lambert) drives the accuracy of every result downstream.
Por qué existe esta calculadora
A280 readings are often reported in instrument software, but converting them into a usable mg/mL number is where mistakes happen — particularly the missing division by path length or the wrong extinction coefficient. The calculator does the unit bookkeeping and shows both the 1-A280 and Beer–Lambert results side by side.
Supuestos clave
- The spectrophotometer was blanked with the same buffer the sample was diluted into.
- For the 1-A280 path, the protein mixture is roughly "average" (e.g. a crude lysate); for purified proteins use the calculated path.
- Path length is 1 cm, or the instrument has been corrected for a different path length.
Limitaciones
- The 1 A280 = 1 mg/mL assumption fails badly for samples rich in nucleic acids (use A260/A280 subtraction).
- It cannot detect proteins that lack aromatic residues or are present at sub-A280 noise-floor concentrations.
- It does not distinguish folded from denatured protein — the extinction coefficient assumes the folded environment.
Qué calcula
- Concentración mg/mL
- Protein concentration in the original (undiluted) sample.
- Concentración molar µM
- Molar concentration — shown in ε + molecular-weight mode.
Preguntas frecuentes
¿Cómo calculo la concentración de proteína a partir de una lectura de A280?
La calculadora aplica la ley de Beer–Lambert a un A280 corregido en blanco: divide la absorbancia entre tu coeficiente de extinción y multiplica por el factor de dilución. Aporta el coeficiente másico E(1 mg/mL) para obtener mg/mL directamente, o el coeficiente molar ε junto con el peso molecular para obtener mg/mL y µM. Introduce 1 como factor de dilución para una lectura sin diluir.
¿Debo usar E(1 mg/mL) o el coeficiente de extinción molar?
Usa el coeficiente que realmente tengas. E(1 mg/mL) es la absorbancia de una solución 1 mg/mL en un paso de luz de 1 cm, así que por sí solo da la concentración en mg/mL — la BSA, por ejemplo, es unos 1,4. El coeficiente molar ε en M⁻¹·cm⁻¹ necesita también el peso molecular en g/mol, y es la opción que además informa la concentración en µM.
¿Qué mide realmente el valor de A280 en una muestra de proteína?
Las proteínas absorben luz UV a 280 nm sobre todo por sus restos de triptófano, tirosina y cistina, así que la absorbancia escala con la cantidad de proteína en el paso de luz. Esa relación queda fija solo cuando aportas el coeficiente específico de tu proteína, por eso la calculadora pide E(1 mg/mL) o ε. La ventaja es que el método necesita solo unos microlitros y deja la muestra usable para el trabajo posterior.
¿Por qué el resultado muestra mg/mL y µM, y cuándo usar cada uno?
Ambos aparecen cuando trabajas en el modo molar, porque el peso molecular permite a la calculadora convertir entre masa y cantidad. mg/mL es la unidad práctica para diluir un stock a una concentración de trabajo o cargar un gel, mientras que µM importa cuando la estequiometría molar gobierna el experimento, como en ensayos de unión o enzimáticos. En el modo E(1 mg/mL) solo se informa mg/mL, ya que no se introdujo peso molecular.
¿Qué hará que mi concentración de proteína por A280 sea incorrecta?
La contaminación por ácidos nucleicos infla el A280 y empuja la concentración calculada hacia arriba, así que revisa la relación 260/280 de la muestra y corrige si hace falta. Componentes del tampón que absorben cerca de 280 nm, como DTT a alta concentración, imidazol o Tritón, también sesgan la lectura, así que haz el blanco con el mismo tampón. La calculadora asume un paso de luz de 1 cm y un coeficiente acorde con tu proteína y su estado reductor, y no aplica ninguna corrección de contaminación propia.
Solo para uso en investigación y docencia. No destinado a decisiones clínicas o de diagnóstico. Verifique siempre los cálculos de forma independiente antes de usarlos en aplicaciones críticas.