Calculadora de Concentración de Ácidos Nucleicos
Convierta una lectura de A260 del espectrofotómetro en concentración de ADN o ARN usando los factores de absorbancia estándar (50 µg/mL para ADNdc, 40 µg/mL para ARN, 33 µg/mL para ADNsc). Introduzca el factor de dilución usado para la lectura y, opcionalmente, un A280 para calcular la pureza A260/A280.
Calculadora
Introduzca una lectura y calcule para ver la concentración
Concentración
Nota de laboratorio
c (µg/mL) = A260 × dilution factor × factor
Una unidad de absorbancia de 1,0 a 260 nm corresponde a 50 µg/mL de ADN bicatenario, 33 µg/mL de ADN monocatenario o 40 µg/mL de ARN. El factor de dilución escala la lectura de vuelta a la muestra original. Rendimiento = concentración × volumen ÷ 1000.
Acerca de este cálculo
Qué es
Los ácidos nucleicos absorben a 260 nm, y la absorbancia de una solución 1 mg/mL en un paso de 1 cm es una constante publicada (50 para ADNdc, 40 para ARN, 33 para ADNsc). Midiendo A260 en una alícuota diluida y multiplicando por el factor de dilución y la constante adecuada se obtiene la concentración del stock.
Por qué se usa
Every downstream application — PCR, sequencing, transfection, in vitro transcription — needs an accurate nucleic acid concentration. A260 is the most accessible bench measurement, but the constant and dilution must be applied correctly.
Por qué existe esta calculadora
Mixing up the absorbance factor (50 vs 40 vs 33) or forgetting the dilution factor are the two classic bench errors. The calculator makes the constant explicit, multiplies by your dilution, and reports a purity ratio when you also provide an A280.
Supuestos clave
- El espectrofotómetro se blanqueó correctamente con el mismo tampón en el que se diluyó la muestra.
- La muestra es lo suficientemente pura a A260 para que se aplique Beer–Lambert (A260 < ~1,5).
- El paso de luz es 1 cm (o su instrumento se ha corregido para un paso distinto).
Limitaciones
- A260 cannot distinguish DNA from RNA — use a fluorometric assay for that.
- Contaminants such as phenol or carbohydrates inflate A260, producing overestimated concentrations.
- Very low concentrations (A260 < 0.05) are at the noise floor of standard spectrophotometers.
Qué calcula
- Concentración µg/mL
- Analyte concentration in the original sample: A260 × dilution factor × conversion factor.
- Rendimiento total µg
- Total mass of analyte in the final volume (shown when a volume is supplied).
- Relación A260/A280
- Purity indicator (shown when A280 is supplied). Typical pure ranges: dsDNA 1.7–2.0, ssDNA 1.8–2.0, RNA 1.9–2.1.
Preguntas frecuentes
¿Cómo convierto una lectura de A260 en concentración de ADN o ARN?
Multiplique la A260 corregida en blanco por el factor de dilución total y por el factor de conversión de su analito: concentración (µg/mL) = A260 × factor de dilución × factor. La calculadora aplica el factor correcto automáticamente una vez elige el analito, e informa la concentración de la muestra original. Si introduce también el volumen final, devuelve el rendimiento total en µg.
¿Cuál es la diferencia entre los factores de conversión 50, 40 y 33?
Son las constantes de absorbancia estándar: una lectura de A260 de 1,0 equivale a 50 µg/mL para ADNdc, 40 µg/mL para ARN y 33 µg/mL para ADNsc. El factor que necesita depende solo del analito que mide, así que elija ADNdc, ADNsc o ARN en el campo Analito. Aplicar la constante equivocada es uno de los dos errores clásicos de bancada que esta calculadora está diseñada para evitar.
¿Cuál es una buena relación 260/280 para un ácido nucleico puro?
Los rangos típicos de pureza son 1,7–2,0 para ADNdc, 1,8–2,0 para ADNsc y 1,9–2,1 para ARN. Aportando una lectura opcional de A280, la calculadora informa la relación 260/280 y marca un resultado fuera del rango de su analito, ya que la proteína u otros contaminantes pueden afectar la lectura. Una relación baja es un aviso de pureza, no una muestra rota, y la relación no detecta todos los contaminantes.
¿Debo corregir por la dilución que hice antes de leer la muestra?
Sí. Introduzca la dilución total aplicada a la muestra antes de la lectura, y la calculadora la multiplica para que la concentración informada se refiera a su tubo original y no al alícuota diluida. Leer una muestra de 2 µL en 100 µL, por ejemplo, supone un factor de dilución de 50. Olvidar ese factor es el otro error clásico de bancada, e infraestima la concentración exactamente en la dilución que aplicó.
¿Qué no puede decirme la cuantificación por A260 sobre mi muestra?
Mide el ácido nucleico que absorbe cerca de 260 nm, así que contaminantes como proteína, fenol o nucleótidos libres inflan la concentración aparente, y el método no distingue material intacto de degradado. También asume una lectura corregida en blanco tomada en un paso de luz de 1 cm, u óptica microvolumen equivalente. Use un gel o un análisis de fragmentos para la integridad, y trate la relación de pureza como una herramienta de cribado tosca.
Solo para uso en investigación y docencia. No destinado a decisiones clínicas o de diagnóstico. Verifique siempre los cálculos de forma independiente antes de usarlos en aplicaciones críticas.