Nukleinsäure-Konzentrationsrechner
Wandeln Sie eine A260-Messung am Spektralphotometer mit den Standard-Absorptionsfaktoren (50 µg/mL für dsDNA, 40 µg/mL für RNA, 33 µg/mL für ssDNA) in eine DNA- oder RNA-Konzentration um. Geben Sie den für die Messung verwendeten Verdünnungsfaktor ein, und optional eine A280, um das A260/A280-Reinheitsverhältnis zu berechnen.
Rechner
Messwert eingeben und berechnen, um die Konzentration zu sehen
Konzentration
Laborhinweis
c (µg/mL) = A260 × dilution factor × factor
Eine Absorptionseinheit von 1,0 bei 260 nm entspricht 50 µg/mL doppelsträngiger DNA, 33 µg/mL einzelsträngiger DNA oder 40 µg/mL RNA. Der Verdünnungsfaktor rechnet den Messwert auf die Originalprobe zurück. Ausbeute = Konzentration × Volumen ÷ 1000.
Zu dieser Berechnung
Worum es geht
Nukleinsäuren absorbieren bei 260 nm, und die Extinktion einer 1 mg/mL-Lösung bei 1 cm Schichtdicke ist eine publizierte Konstante (50 für dsDNA, 40 für RNA, 33 für ssDNA). Die A260-Messung einer verdünnten Aliquote, multipliziert mit dem Verdünnungsfaktor und der passenden Konstante, ergibt die Stammkonzentration.
Warum man es verwendet
Every downstream application — PCR, sequencing, transfection, in vitro transcription — needs an accurate nucleic acid concentration. A260 is the most accessible bench measurement, but the constant and dilution must be applied correctly.
Warum es diesen Rechner gibt
Mixing up the absorbance factor (50 vs 40 vs 33) or forgetting the dilution factor are the two classic bench errors. The calculator makes the constant explicit, multiplies by your dilution, and reports a purity ratio when you also provide an A280.
Wichtige Annahmen
- Das Spektralphotometer wurde mit demselben Puffer korrekt geblankt, in dem die Probe verdünnt wurde.
- Die Probe ist bei A260 rein genug, damit das Beer–Lambert-Gesetz gilt (A260 < ~1,5).
- Die Schichtdicke beträgt 1 cm (oder Ihr Gerät wurde für eine andere Schichtdicke korrigiert).
Einschränkungen
- A260 cannot distinguish DNA from RNA — use a fluorometric assay for that.
- Contaminants such as phenol or carbohydrates inflate A260, producing overestimated concentrations.
- Very low concentrations (A260 < 0.05) are at the noise floor of standard spectrophotometers.
Was berechnet wird
- Konzentration µg/mL
- Analyte concentration in the original sample: A260 × dilution factor × conversion factor.
- Gesamtausbeute µg
- Total mass of analyte in the final volume (shown when a volume is supplied).
- A260/A280-Verhältnis
- Purity indicator (shown when A280 is supplied). Typical pure ranges: dsDNA 1.7–2.0, ssDNA 1.8–2.0, RNA 1.9–2.1.
Häufig gestellte Fragen
Wie rechne ich eine A260-Messung in eine DNA- oder RNA-Konzentration um?
Multiplizieren Sie die geblankte A260 mit dem Gesamt-Verdünnungsfaktor und dem Umrechnungsfaktor Ihres Analyten: Konzentration (µg/mL) = A260 × Verdünnungsfaktor × Faktor. Der Rechner wendet den passenden Faktor automatisch an, sobald Sie den Analyten wählen, und gibt die Konzentration der Originalprobe an. Geben Sie zusätzlich das Endvolumen ein, erhalten Sie die Gesamtausbeute in µg.
Was ist der Unterschied zwischen den Umrechnungsfaktoren 50, 40 und 33?
Das sind die Standard-Absorptionskonstanten: ein A260-Wert von 1,0 entspricht 50 µg/mL für dsDNA, 40 µg/mL für RNA und 33 µg/mL für ssDNA. Der benötigte Faktor hängt nur vom gemessenen Analyten ab, wählen Sie also im Feld Analyte dsDNA, ssDNA oder RNA. Die falsche Konstante anzuwenden ist einer der zwei klassischen Bankfehler, gegen die dieser Rechner schützen soll.
Was ist ein gutes A260/A280-Verhältnis für reine Nukleinsäure?
Die üblichen Reinheitsbereiche sind 1,7–2,0 für dsDNA, 1,8–2,0 für ssDNA und 1,9–2,1 für RNA. Wenn Sie optional eine A280-Messung angeben, meldet der Rechner das A260/A280-Reinheitsverhältnis und markiert Werte außerhalb des Bereichs für Ihren Analyten, da Protein oder andere Verunreinigungen die Messung beeinflussen können. Ein niedrigeres Verhältnis ist eine Reinheitswarnung, keine kaputte Probe, und das Verhältnis erkennt nicht jede Verunreinigung.
Muss ich die Verdünnung korrigieren, die ich vor der Messung vorgenommen habe?
Ja. Geben Sie die gesamte Verdünnung an, die vor der Messung auf die Probe angewendet wurde, und der Rechner rechnet sie durch, sodass die gemeldete Konzentration sich auf Ihr Originalröhrchen bezieht und nicht auf das verdünnte Aliquot. Eine 2 µL Probe, die in 100 µL gelesen wird, ergibt beispielsweise einen Verdünnungsfaktor von 50. Diesen Faktor zu vergessen ist der andere klassische Bankfehler, und er unterberichtet die Konzentration genau um die angewendete Verdünnung.
Was kann die A260-Quantifizierung mir nicht über meine Probe sagen?
Sie misst Nukleinsäure, die nahe 260 nm absorbiert, daher blähen Verunreinigungen wie Protein, Phenol oder freie Nukleotide die scheinbare Konzentration auf, und die Methode kann intaktes nicht von degradiertem Material unterscheiden. Sie setzt außerdem eine geblankte Messung bei 1 cm Schichtdicke oder gleichwertiger Mikrovolume-Optik voraus. Nutzen Sie ein Gel oder eine Fragmentanalyse für die Integrität und betrachten Sie das Reinheitsverhältnis als grobes Screening-Werkzeug.
Nur für Forschung und Lehre. Nicht für klinische oder diagnostische Entscheidungen. Prüfen Sie Berechnungen vor kritischen Anwendungen immer eigenständig nach.