Calcolatore di concentrazione degli acidi nucleici
Converti una lettura A260 allo spettrofotometro in concentrazione di DNA o RNA usando i fattori di assorbanza standard (50 µg/mL per DNAds, 40 µg/mL per RNA, 33 µg/mL per DNAss). Inserisci il fattore di diluizione usato per la lettura, e opzionalmente un A280 per calcolare il rapporto di purezza A260/A280.
Calcolatore
Inserisci una lettura e calcola per vedere la concentrazione
Concentrazione
Nota da banco
c (µg/mL) = A260 × dilution factor × factor
Un'unità di assorbanza a 1,0 a 260 nm corrisponde a 50 µg/mL di DNA a doppio filamento, 33 µg/mL di DNA a singolo filamento o 40 µg/mL di RNA. Il fattore di diluizione riporta la lettura al campione originale. Resa = concentrazione × volume ÷ 1000.
Informazioni su questo calcolo
Che cos'è
Gli acidi nucleici assorbono a 260 nm, e l’assorbanza di una soluzione 1 mg/mL con cammino ottico di 1 cm è una costante pubblicata (50 per DNAds, 40 per RNA, 33 per DNAss). Misurando l’A260 su un’aliquota diluita e moltiplicando per il fattore di diluizione e la costante corretta si ottiene la concentrazione dello stock.
Perché si usa
Every downstream application — PCR, sequencing, transfection, in vitro transcription — needs an accurate nucleic acid concentration. A260 is the most accessible bench measurement, but the constant and dilution must be applied correctly.
Perché esiste questo calcolatore
Mixing up the absorbance factor (50 vs 40 vs 33) or forgetting the dilution factor are the two classic bench errors. The calculator makes the constant explicit, multiplies by your dilution, and reports a purity ratio when you also provide an A280.
Ipotesi fondamentali
- Lo spettrofotometro è stato azzerato correttamente con lo stesso tampone in cui il campione è stato diluito.
- Il campione è abbastanza puro ad A260 perché la legge di Beer–Lambert valga (A260 < ~1,5).
- Il cammino ottico è di 1 cm (o il tuo strumento è stato corretto per un cammino diverso).
Limiti
- A260 cannot distinguish DNA from RNA — use a fluorometric assay for that.
- Contaminants such as phenol or carbohydrates inflate A260, producing overestimated concentrations.
- Very low concentrations (A260 < 0.05) are at the noise floor of standard spectrophotometers.
Che cosa calcola
- Concentrazione µg/mL
- Analyte concentration in the original sample: A260 × dilution factor × conversion factor.
- Resa totale µg
- Total mass of analyte in the final volume (shown when a volume is supplied).
- Rapporto A260/A280
- Purity indicator (shown when A280 is supplied). Typical pure ranges: dsDNA 1.7–2.0, ssDNA 1.8–2.0, RNA 1.9–2.1.
Domande frequenti
Come converto una lettura A260 in concentrazione di DNA o RNA?
Moltiplica l'A260 corretto in bianco per il fattore di diluizione totale e per il fattore di conversione del tuo analita: concentrazione (µg/mL) = A260 × fattore di diluizione × fattore. Il calcolatore applica automaticamente il fattore corretto una volta scelto l'analita e riporta la concentrazione del campione originale. Inserisci anche il volume finale e restituisce la resa totale in µg.
Qual è la differenza tra i fattori di conversione 50, 40 e 33?
Sono le costanti di assorbanza standard: una lettura A260 di 1,0 corrisponde a 50 µg/mL per il DNAds, 40 µg/mL per l'RNA e 33 µg/mL per il DNAss. Il fattore che ti serve dipende solo dall'analita che stai misurando, quindi scegli DNAds, DNAss o RNA nel campo Analita. Applicare la costante sbagliata è uno dei due classici errori da banco che questo calcolatore è progettato per prevenire.
Qual è un buon rapporto 260/280 per un acido nucleico puro?
Gli intervalli tipici di purezza sono 1,7–2,0 per il DNAds, 1,8–2,0 per il DNAss e 1,9–2,1 per l'RNA. Fornendo una lettura A280 opzionale, il calcolatore riporta il rapporto 260/280 e segnala un risultato fuori dall'intervallo per il tuo analita, poiché proteine o altri contaminanti possono alterare la lettura. Un rapporto basso è un avviso di purezza, non un campione rotto, e il rapporto non rileva ogni contaminante.
Devo correggere la diluizione che ho fatto prima di leggere il campione?
Sì. Inserisci la diluizione totale applicata al campione prima della lettura, e il calcolatore la moltiplica così che la concentrazione riportata si riferisca alla tua provetta originale e non all'aliquota diluita. Leggere un campione di 2 µL in 100 µL corrisponde, per esempio, a un fattore di diluizione di 50. Dimenticare quel fattore è l'altro classico errore da banco, e sottostima la concentrazione esattamente della diluizione applicata.
Cosa non può dirmi la quantificazione A260 sul mio campione?
Misura l'acido nucleico che assorbe vicino a 260 nm, quindi contaminanti come proteine, fenolo o nucleotidi liberi gonfiano la concentrazione apparente, e il metodo non distingue il materiale integro da quello degradato. Presuppone anche una lettura corretta in bianco presa in un cammino ottico di 1 cm, o un'ottica microvolume equivalente. Usa un gel o un'analisi dei frammenti per l'integrità, e tratta il rapporto di purezza come uno strumento di screening grossolano.
Solo per uso didattico e di ricerca. Non destinato a decisioni cliniche o diagnostiche. Verificare sempre i calcoli in modo indipendente prima di usi critici.