Calculadora de Concentração de Proteínas
Duas formas de estimar a concentração de proteína. (1) Beer–Lambert: informe o coeficiente de extinção molar e a massa molar da sua proteína para converter A280 em mg/mL. (2) A280 × 1 = mg/mL usando a hipótese padrão 1 A280 = 1 mg/mL, válida para amostras de proteínas mistas. A calculadora também informa uma nota de pureza A260/A280.
Calculadora
Digite uma leitura e calcule para ver a concentração
Concentração
c = A280 × dilution ÷ E(1 mg/mL) · c(M) = A280 × dilution ÷ ε
Quantificação de Beer–Lambert: a absorbância a 280 nm é proporcional à concentração pelo coeficiente de extinção da proteína. No modo molar, o resultado também é convertido em mg/mL usando a massa molecular.
Sobre este cálculo
O que é
Proteins absorb at 280 nm because of aromatic residues (tryptophan, tyrosine, and to a lesser extent cystine). For a purified protein with a known molar extinction coefficient, Beer–Lambert gives an accurate concentration; for a mixed or unknown sample, the heuristic 1 A280 = 1 mg/mL is a usable estimate.
Por que é usado
Almost every downstream application — gel loading, dilution to a working stock, assay setup — needs a protein concentration. A280 is the fastest available measurement, but the assumption you make (1 mg/mL per A280 vs. Beer–Lambert) drives the accuracy of every result downstream.
Por que esta calculadora existe
A280 readings are often reported in instrument software, but converting them into a usable mg/mL number is where mistakes happen — particularly the missing division by path length or the wrong extinction coefficient. The calculator does the unit bookkeeping and shows both the 1-A280 and Beer–Lambert results side by side.
Premissas principais
- The spectrophotometer was blanked with the same buffer the sample was diluted into.
- For the 1-A280 path, the protein mixture is roughly "average" (e.g. a crude lysate); for purified proteins use the calculated path.
- Path length is 1 cm, or the instrument has been corrected for a different path length.
Limitações
- The 1 A280 = 1 mg/mL assumption fails badly for samples rich in nucleic acids (use A260/A280 subtraction).
- It cannot detect proteins that lack aromatic residues or are present at sub-A280 noise-floor concentrations.
- It does not distinguish folded from denatured protein — the extinction coefficient assumes the folded environment.
O que é calculado
- Concentração mg/mL
- Protein concentration in the original (undiluted) sample.
- Concentração molar µM
- Molar concentration — shown in ε + molecular-weight mode.
Perguntas frequentes
Como calculo a concentração de proteína a partir de uma leitura de A280?
A calculadora aplica a lei de Beer–Lambert a um A280 corrigido em branco: divida a absorbância pelo seu coeficiente de extinção e multiplique pelo fator de diluição. Forneça o coeficiente mássico E(1 mg/mL) para obter mg/mL diretamente, ou o coeficiente molar ε junto com a massa molecular para obter mg/mL e µM. Digite 1 como fator de diluição para uma leitura não diluída.
Devo usar E(1 mg/mL) ou o coeficiente de extinção molar?
Use o coeficiente que você realmente tem. E(1 mg/mL) é a absorbância de uma solução a 1 mg/mL em caminho óptico de 1 cm, então fornece sozinho a concentração em mg/mL — a BSA, por exemplo, é cerca de 1,4. O coeficiente molar ε em M⁻¹·cm⁻¹ precisa também da massa molecular em g/mol, e é a opção que também reporta a concentração em µM.
O que o valor de A280 mede de fato em uma amostra de proteína?
As proteínas absorvem luz UV em 280 nm principalmente pelos resíduos de triptofano, tirosina e cistina, então a absorbância escala com a quantidade de proteína no caminho óptico. Essa relação só fica fixa quando você fornece o coeficiente específico da sua proteína, por isso a calculadora pede E(1 mg/mL) ou ε. A vantagem é que o método exige apenas poucos microlitros e deixa a amostra utilizável para o trabalho a jusante.
Por que o resultado mostra mg/mL e µM, e quando usar cada um?
Ambos aparecem quando você trabalha no modo molar, porque a massa molecular permite à calculadora converter entre massa e quantidade. mg/mL é a unidade prática para diluir um estoque a uma concentração de trabalho ou carregar um gel, enquanto µM importa quando a estequiometria molar rege o experimento, como em ensaios de ligação ou enzimáticos. No modo E(1 mg/mL) só mg/mL é reportado, já que nenhuma massa molecular foi informada.
O que deixará minha concentração de proteína por A280 errada?
A contaminação por ácidos nucleicos infla o A280 e empurra a concentração calculada para cima, então verifique a relação 260/280 da amostra e corrija se necessário. Componentes do tampão que absorvem perto de 280 nm, como DTT em alta concentração, imidazol ou Triton, também enviesam a leitura, então faça o branco com o mesmo tampão. A calculadora pressupõe caminho óptico de 1 cm e um coeficiente compatível com a sua proteína e seu estado redutor, e não aplica nenhuma correção de contaminação própria.
Apenas para uso em pesquisa e ensino. Não destinado a decisões clínicas ou de diagnóstico. Sempre verifique os cálculos de forma independente antes de usos críticos.